TMB Chromogen Solution (HRP-based Elisa)
TMB 显色液(Elisa HRP 显色用)
产品详情:
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
NBS2362-100ml | TMB显色液(Elisa HRP显色用) | 100ml |
NBS2362-500ml | TMB显色液(Elisa HRP显色用) | 500ml |
产品简介:
TMB(3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine)是辣根过氧化物酶(HRP)的常用显色底物之一。在HRP 的催化下,TMB 被 H2O2 氧化生成蓝色产物。主要吸收峰在 370nm 和 652nm。在加入硫酸或者磷酸终止上述反应后,产物转变为黄色,最大吸收峰为 450 nm。传统的 TMB 显色试剂通常以AB液形式提供(TMB和H2O2 溶液分到两管,使用前才可混合使用),并且容易产生沉淀,使用起来相对不方便,且容易导致操作误差。为克服以上缺点,本产品采用最新的TMB显色技术,将所有相关试剂混合配成单一溶液。
产品特点:
1. 即开即用,操作简单,使用前无需做AB液混合的准备;检测灵敏度不低于AB液体系;
2. 仅由单一溶液组成,简化了操作步骤,也降低了操作误差,结果更加稳定;
3. 含有独特的稳定剂,保证溶液 4℃下长期保存;
4. 相比于其他HRP酶显色底物(如ABTS 和OPD),检测灵敏度更高,而且本TMB溶液不含有DMF或DMSO等有机溶剂,安全无毒。
使用方法:
1.使用之前,取出适量单组份 TMB 显色液,使其回到室温再开始使用。
2.对于ELISA检测:参考ELISA检测试剂盒的实验步骤,当加入HRP标记的抗体并孵育一段时间后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5min。洗涤完毕后,去除洗涤液,加入100μl TMB显色液。
3.一般室温避光孵育10-30min,也可根据具体实验需要孵育更长时间,直至显色至预期深浅(此时反应液为蓝色)。
4.加入50μl 的2N 盐酸(2mol/L)或者硫酸(1mol/L)溶液终止反应,溶液由蓝色转变为黄色,随后在450nm 测定吸光度。
常见问题:
一. 背景显色太深
1.如果背景(没有样品的对照)显色太深,一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭,如商业化的封闭液或者商业化的和一抗相同来源的血清(5-10%)进行封闭。另一方面,直接使用经过适当亲和吸附的二抗,以减小二抗的非特异性交叉吸附。
2.可以考虑缩短显色时间,或降低二抗浓度。另外,选择适当强度的洗涤液,或延长洗涤时间。
3.可考虑TMB底物本身反应过于强烈。为了避免沉淀的产生,可在终止反应后马上读数,或者进一步稀释一抗和HRP结合物。
二. 没有显色或显色太弱
1.适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果,滴一滴稀释二抗在离心管内,检测二抗是否被正常显色。
2.可以使用更加灵敏的放大检测体系,例如使用生物素检测体系。
3.可以适当延长显色时间。
4.如果上述改进不能获得预期效果,可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA
注意事项:
1、TMB 对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
2、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
4℃避光保存,有效期一年。