单克隆抗体的生产涉及将骨髓瘤细胞与脾细胞融合,并在含有次黄嘌呤-氨甲蝶呤-胸苷(HAT)补充培养基中选择杂交瘤(细胞杂交体)。氨甲蝶呤通过抑制二氢叶酸还原酶阻断DNA的合成。缺乏利用核苷酸补救途径能力的细胞会被淘汰。具有次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRTase)和胸苷激酶(TK)酶的细胞,在提供次黄嘌呤和胸苷的情况下可以利用补救途径。
这种培养基的目的在于:(1)选择性地杀死那些适应组织培养、否则会胜过任何产生的杂交瘤的未融合骨髓瘤细胞;(2)消除缺乏HPRT酶的骨髓瘤-骨髓瘤杂交瘤。HPRT酶阳性的脾脏-脾脏杂交瘤虽然对氨甲蝶呤不敏感,但在培养中通常寿命较短。
在选择完成后(大约10-14周),通过在含有次黄嘌呤-胸苷(HT)的培养基中多次传代(大约2-3周)将氨甲蝶呤从培养物中稀释,然后再转移到正常杂交瘤生长培养基中。